Клинические исследования препарата Проваг
Влияние перорального приема трех пробиотических штаммов Lactobacillus на улучшение рН и состава бактериальной микрофлоры женщин репродуктивного возраста
Проведены при участии:
Магдалена Струс (Ph.D.)Исследовательская лаборатории экологии микроорганизмов, кафедра микробиологии, Медицинская коллегия Ягеллонского университета, Краков
Петр Кочан (MD), профессор Петр Б. Хечко (MD, Ph.D.)
Институт бактериологии, экологии микроорганизмов и паразитологии, кафедра микробиоло-гии, Медицинская коллегия Ягеллонского университета, Краков
Збигнев Хелмицки (MD, Ph.D.), Артур Хелмицки (MD)
Кафедра гинекологической эндокринологии, Медицинский университет Силезии, Катовице
Гжегож Стефаньски (MD), Катаржина Дехник (MSc), Эва Яблоньска (MSc)
Институт биотехнологии сывороток и вакцин, Краков
Введение
Нормальная вагинальная бактериальная флора на 96% состоит из грамположительных Lac-tobacilli, среди которых доминируют L. Gasseri. Антибактериальные свойства Lactobacilli, в частности, образование летучих жирных кислот, перекиси водорода и бактериоцин-подобных пептидов, ограничивают популяцию условно-патогенных бактерий, за счет актив-ного снижения их роста.Было проведено исследование группы, состоящей из 33 женщин с рецидиви-рующим вульво-вагинальным кандидозом. В течение 6 месяцев для профилактики рецидивов заболевания пациенты ежедневно получали йогурт, содержащий Lactobacillus acidophilus. На заключительном этапе данного исследования проводилась оценка степени колонизации влагалища и прямой кишки Candida и Lactobacillus, а также наличия кандидоза.
Только 13 пациентов закончило данное исследование, однако в анализ были включены все 33 женщины. В течение 6 месяцев было выявлено достоверное снижение количества инфекций, вызванных Candida, у женщин с установленной колонизацией Candida влагалищного содержимого (как в прямой кишке, так и во влагалище). Концепция перорального приема препаратов, содержащих штаммы Lactobacillus, хорошо обоснована тем, что она воспроизводит естественные механизмы, которые не только приводят к росту популяции соответствующим образом отобранных видов Lactobacillus, но также ограничивают свободное перемещение этиологических факторов инфекций из прямой кишки во влагалище. Ученые подтвердили данную концепцию в исследовании, которое показало наличие связи между колонизацией толстой кишки большой популяцией Lactobacillus и снижением заболеваемости женщин бактериальным вагинозом; продемонстрировали практическое применение способности пробиотических штаммов при пероральном приеме колонизировать прямую кишку, а затем и влагалище.
Цель:
целью данного исследования являлось определение влияния пищевой добавки, состоящей из смеси трех пробиотических штаммов Lactobacillus, на общее количество Lactobacillus во влагалище и прямой кишке и на основные физиологические параметры влагалища (рН, балл по шкале Нугента) у женщин репродуктивного возраста без признаков бактериального вагиноза, но с отклонением от нормы по следующим показателям: значение вагинального рН выше 4,5, балл по шкале Нугента больше 3 и низкая популяция Lactobacillus (менее 1 × 106 КОЕ/мл).
Оценка вагинальной флоры микроскопическим методом по шкале Нугента:
оценка вагинальной флоры на окрашенных по Граму мазках проводилось в соответствие со шкалой Нугента по соотношению специфических морфотипов в поле зрения. Морфотип I – грамположительные палочки (Lactobacillus), морфотип II – грамотрицательные и грамвариабельные палочки (Gardnerella vaginalis, Bacteroids sp.), морфотип III – грамвариабельные па-лочки (Mobiluncus sp.) и грамположительные кокки. Исследование было слепым: проводившие его специально проинструктированные микробиологи не имели никакой персональной информации о пациентах.
Материалы и методы:
тип исследования — одноцентровое, открытое, плацебо-неконтролируемое, неослепленное, нерандомизированное
Число добровольцев:
37 женщин были включены в исследование, 25 из них завершили пол-ный цикл исследования
Популяция:
здоровые женщины в возрасте от 18 до 55 лет с показаниями к лечению иссле-дуемым препаратом, соответствующие ниже перечисленным критериям включения в испы-тание
- Показания к комплементации или восстановлению вагинальной флоры в связи с высоким рН и баллом по шкале Нугента
- Отсутствие симптомов инфекции половых путей
- Наличие в медицинском анамнезе рецидивов инфекции мочеполовых путей
- Соблюдение правил личной гигиены
- Желание сотрудничать во время исследования
- Наличие аллергии к любому из компонентов исследуемого препарата
- Беременность
- Кормление грудью
- Использование контрацептивов, содержащих спермициды
- Использование внутриматочных спиралей
- Участие в других клинических испытаниях, которые могут оказывать прямое воздействие на флору мочеполового тракта и отсутствие 30-х дневного перерыва между исследованиями
- Прием другого перорального или вагинального пробиотика
Критерии включения в испытание:
- Возраст пациента: ≥18 и ≤55 лет- Показания к комплементации или восстановлению вагинальной флоры в связи с высоким рН и баллом по шкале Нугента
- Отсутствие симптомов инфекции половых путей
- Наличие в медицинском анамнезе рецидивов инфекции мочеполовых путей
- Соблюдение правил личной гигиены
- Желание сотрудничать во время исследования
Критерии исключения из испытания:
- Возраст пациента: ≤18 и ≥55 лет- Наличие аллергии к любому из компонентов исследуемого препарата
- Беременность
- Кормление грудью
- Использование контрацептивов, содержащих спермициды
- Использование внутриматочных спиралей
- Участие в других клинических испытаниях, которые могут оказывать прямое воздействие на флору мочеполового тракта и отсутствие 30-х дневного перерыва между исследованиями
- Прием другого перорального или вагинального пробиотика
Исследуемый препарат:
пищевая добавка Проваг (содержит 1х109 КОЕ мочекислых бактерий в соотношении: Lactobacillus gasseri 57С 50%, Lactobacillus fermentum 57А 25%, Lactoba-cillus plantarum 57В 25%). 1 капсулу Проваг принимали перорально, один раз в день, в течение 60 дней (приблизительно 2 месяца).
Схема и длительность исследования:
каждый испытуемый посещал исследовательский центр 8 раз. Выполнялись следующие исследования: гинекологический осмотр, измерение рН влагалища, исследование мазков. Микробиологические исследования: баллы по шкале Нугента, количественная оценка популяции штаммов Lactobacillus в ректальной и вагиналь-ной флоре. Исследование назначено в июне 2006 г и закончено в июне 2007 г.
- Изменение баллов по шкале Нугента
- Изменения в размере популяции штаммов Lactobacillus во влагалище
- Изменения в размере популяции штаммов Lactobacillus в прямой кишке
Параметры заключения:
- Изменение вагинального рН- Изменение баллов по шкале Нугента
- Изменения в размере популяции штаммов Lactobacillus во влагалище
- Изменения в размере популяции штаммов Lactobacillus в прямой кишке
Безопасность:
регистрацию побочных реакций проводили во время каждого визита.
Результаты исследований
В соответствии с протоколом исследования анализ рН проводился во время визитов I-VIII, тогда как расчет баллов по шкале Нугента и количественный анализ состава вагинальной и ректальной флоры на наличие штаммов Lactobacillus в мазках выполняли в лаборатории.
Установлено изменение значения рН с каждым последующим визитом (Н=38,1921 p<0.0001), связанное с приемом препарата. Результаты статистической обработки с использованием теста Стила-Двасса показали достоверные изменения от начального этапа исследования (визит I) до визита VI и сохранение этих изменений до VIII визита. Срединное значение рН тестов для всего анализируемого периода было отмечено вод время визитов IV и V.
Установлено изменение значения рН с каждым последующим визитом (Н=38,1921 p<0.0001), связанное с приемом препарата. Результаты статистической обработки с использованием теста Стила-Двасса показали достоверные изменения от начального этапа исследования (визит I) до визита VI и сохранение этих изменений до VIII визита. Срединное значение рН тестов для всего анализируемого периода было отмечено вод время визитов IV и V.
Результаты представлены на схеме 1.
Также было показано, что баллы по шкале Нугента изменялись с каждым последующим визитом (Н=29,2629; р<0,0001). Статистическая обработка данных (post hoc) показала, что достоверно более высокие значения по сравнению с началом исследования были выявлены на VI и VII визитах. Данное изменение отсутствовало между VII и VIII визитами. Возврат результатов к начальному состоянию был настолько отчетливым, что удалось выявить достоверное отличие результатов анализов между VI и VIII визитами. Увеличение баллов по шкале Нугента было связано со второй менструацией между визитами VII и VIII, а также прекращением приема препарата после VII визита.
Также было показано, что баллы по шкале Нугента изменялись с каждым последующим визитом (Н=29,2629; р<0,0001). Статистическая обработка данных (post hoc) показала, что достоверно более высокие значения по сравнению с началом исследования были выявлены на VI и VII визитах. Данное изменение отсутствовало между VII и VIII визитами. Возврат результатов к начальному состоянию был настолько отчетливым, что удалось выявить достоверное отличие результатов анализов между VI и VIII визитами. Увеличение баллов по шкале Нугента было связано со второй менструацией между визитами VII и VIII, а также прекращением приема препарата после VII визита.
Результаты представлены на схеме 2.
Статистически достоверные изменения, которые были вызваны приемом пробиотического препарата, также были выявлены для числа Lactobacillus, выделенных из вагинального эпителия в течение всех этапов исследования (Н=26,6240; р=0,0002). Статистическая обработка данных (post hoc) показала достоверное увеличение общего числа Lactobacillus во время визитов IV, V и VII по сравнению с первоначальным.
Также было отмечено, что Проваг обладает сходным влиянием на количество Lactobacillus в прямой кишке. Статистически было доказано достоверное увеличение числа Lactobacillus (Н=55,0157; р<0,0001). С помощью статистической обработки данных было показано, что ко-личество Lactobacillus, выявленное на III визите, уже достоверно отличалось от первона-чального и сохранялось на высоком уровне до окончания исследования.
Препарат отличался хорошей переносимостью, и не было отмечено никаких побочных реакций, связанных с его применением.
В наших исследованиях были использованы 3 штамма различных видов Lactobacillus, происходящих из нормальной вагинальной флоры, и их высокая аффиность к вагинальному эпителию была доказана в исследованиях in vitro. Кроме того, бактерии проявили высокую выживаемость в желудочно-кишечном тракте, а также адгезионные свойства к эпителиальным клеткам толстого кишечника в условиях in vitro. Благодаря этим особенностям, при пероральном приеме рассматриваемых штаммов в виде препарата Проваг достигается благоприятное воздействие на состав вагинальной флоры у женщин с рецидивирующем бактериальным вагинозом в анамнезе, связанного со снижением вагинального показателя рН и баллов по шкале Нугента, и увеличение популяции Lactobacillus во влагалище и прямой кишке.
Следует отметить, что возврат значений рН и баллов по шкале Нугента к их начальным значениям после первой менструации и окончания приема Проваг не сопровождалось снижением числа Lactobacillus, особенно в прямой кишке. Вероятно, что более длительное наблюдение обследуемых женщин привело бы к выявлению нового снижения вагинальных значений рН и баллов по шкале Нугента в связи с размножением во влагалище новых популяций Lactobacillus, перемещающихся из кишечника. Однако подтверждение данной гипотезы требует проведения дополнительного исследования.
Таким образом, клинические и микробиологические исследования Проваг показали, что препарат значительно увеличивает количество Lactobacillus сначала в прямой кишке, а затем и во влагалище, что сопровождается благоприятными изменениями вагинальных значений рН и баллов по шкале Нугента. Изменения происходят во время приема препарата, однако они исчезают после первой менструации, следующей за отменой приема препарата. Тем не менее, несмотря на менструацию, большое количество Lactobacillus сохраняется в прямой кишке.
Препарат Проваг отличается хорошей переносимостью и легкостью в использовании. Следует признать, что пероральный прием препарата один раз в день более удобен для применения, чем использование вагинальных препаратов.
Статистически достоверные изменения, которые были вызваны приемом пробиотического препарата, также были выявлены для числа Lactobacillus, выделенных из вагинального эпителия в течение всех этапов исследования (Н=26,6240; р=0,0002). Статистическая обработка данных (post hoc) показала достоверное увеличение общего числа Lactobacillus во время визитов IV, V и VII по сравнению с первоначальным.
Также было отмечено, что Проваг обладает сходным влиянием на количество Lactobacillus в прямой кишке. Статистически было доказано достоверное увеличение числа Lactobacillus (Н=55,0157; р<0,0001). С помощью статистической обработки данных было показано, что ко-личество Lactobacillus, выявленное на III визите, уже достоверно отличалось от первона-чального и сохранялось на высоком уровне до окончания исследования.
Препарат отличался хорошей переносимостью, и не было отмечено никаких побочных реакций, связанных с его применением.
Выводы
В процессе исследования пробиотиков, применяемых при заболеваниях желудочно-кишечного тракта, было отмечено, что пероральный прием хорошо известного штамма Lactobacillus rhamnosus GG беременными женщинами приводил к временной колонизации новорожденных данным штаммом, что позволило предположить факт перемещения бактерий из пищеварительного тракта во влагалище матери до родов. Молекулярный анализ штаммов уропатогенной E.coli, способной к естественному перемещению во влагалище и мочеиспускательный канал, показал, что такой переход возможен для штаммов со специфическими генами.В наших исследованиях были использованы 3 штамма различных видов Lactobacillus, происходящих из нормальной вагинальной флоры, и их высокая аффиность к вагинальному эпителию была доказана в исследованиях in vitro. Кроме того, бактерии проявили высокую выживаемость в желудочно-кишечном тракте, а также адгезионные свойства к эпителиальным клеткам толстого кишечника в условиях in vitro. Благодаря этим особенностям, при пероральном приеме рассматриваемых штаммов в виде препарата Проваг достигается благоприятное воздействие на состав вагинальной флоры у женщин с рецидивирующем бактериальным вагинозом в анамнезе, связанного со снижением вагинального показателя рН и баллов по шкале Нугента, и увеличение популяции Lactobacillus во влагалище и прямой кишке.
Следует отметить, что возврат значений рН и баллов по шкале Нугента к их начальным значениям после первой менструации и окончания приема Проваг не сопровождалось снижением числа Lactobacillus, особенно в прямой кишке. Вероятно, что более длительное наблюдение обследуемых женщин привело бы к выявлению нового снижения вагинальных значений рН и баллов по шкале Нугента в связи с размножением во влагалище новых популяций Lactobacillus, перемещающихся из кишечника. Однако подтверждение данной гипотезы требует проведения дополнительного исследования.
Заключение
В результате статистической обработки экспериментально полученных данных было показано, что пероральный прием препарата Проваг оказывает благоприятное воздействие на значение рН во влагалище и вагинальную микрофлору. Изменения вагинальных физиологических факторов начинались на IV визите и достигали своего максимума к VI и VII визитам. Влияние приема Проваг на количество Lactobacillus во влагалище становится очевидным к IV визиту и сохраняется до VII визита. Влияние приема Проваг на количество Lactobacillus в прямой кишке становится очевидным к III визиту.Таким образом, клинические и микробиологические исследования Проваг показали, что препарат значительно увеличивает количество Lactobacillus сначала в прямой кишке, а затем и во влагалище, что сопровождается благоприятными изменениями вагинальных значений рН и баллов по шкале Нугента. Изменения происходят во время приема препарата, однако они исчезают после первой менструации, следующей за отменой приема препарата. Тем не менее, несмотря на менструацию, большое количество Lactobacillus сохраняется в прямой кишке.
Препарат Проваг отличается хорошей переносимостью и легкостью в использовании. Следует признать, что пероральный прием препарата один раз в день более удобен для применения, чем использование вагинальных препаратов.
Источник информации: provag.ru
