Гепатопротекторные свойства экстракта мицелия вешенки

Гепатопротекторные свойства экстракта мицелия вешенки

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

В данной работе показано гепатопротекторное действие экстракта мицелия вешенки и препаратов на его основе при экспериментальном токсическом поражении печени различными химическими соединениями. Выявлена высокая антиоксидантная активность препарата, проявляющаяся в активации ферментов антиокислительной системы организма. Применение препаратов у больных с гиперлипидемией и метаболическим синдромом, осложнённым жировым гепатозом и стеатогепатитом, приводило к нормализации липидного обмена и восстановлению функционального состояния печени.
Публикация предназначена для терапевтов, гепатологов, гастроэнтерологов и врачей других специальностей.

Авторский коллектив:
Заслуженный деятель науки РФ, д-р техн. наук, проф. В.П. Герасименя,
кан-т техн. наук С.В. Захаров,
кан-т техн. наук А. Е. Орлов ,
кан-т биол. наук Э.З. Рабинович,
кан-т хим. наук А.В. Трезвова,
кан-т биол.наук Л.М. Шаповалова

В данных информационных материалах представлены результаты экспериментальных и клинических исследований экстракта мицелия вешенки (ЭМВ), представляющего стандартизированный экстракт мицелия на основе оригинального, запатентованного штамма гриба (Pleurotus ostreatus 1137), и препаратов ОВО-Д и ОВОДОРИН на его основе .
Гепатопротекторное действие экстракта показано на различных стандартных экспериментальных моделях в условиях токсического поражения печени химическими соединениями. Выявлен основной механизм действия ЭМВ, заключающийся в его высокой антиоксидантной активности, обеспечивающей подавление «кислородного стресса» в организме и клетках печени, как за счёт содержащихся в экстракте антиоксидантов, так и путём активации ферментов антиокислительной системы организма.
В экспериментальных исследованиях на моделях острого гепатита выявлена способность ЭМВ подавлять процессы цитолиза, нормализовать активность ферментов и метаболизм в клетках печени. Гепатопротекторное действие ЭМВ сочетается с гиполипидемическим эффектом, тем самым предупреждая развитие дегенеративных процессов, перерождение клеток печени и возникновение фиброза.
В клинических исследованиях показано, что при лечении больных с гиперлипидемией препарат ОВО-Д, созданный на основе ЭМВ, в дозе 100 мг в сутки проявляет выраженную липидрегулирующую активность и не оказывает гепатотоксического действия. Применение препарата ОВО-Д у больных с метаболическим синдромом, осложнённы м жировы м гепатозом и стеатогепатитом приводило к нормализации липидного обмена, восстановлению функционального состояния печени и к существенному снижению выраженности симптомов основного заболевания.

ВВЕДЕНИЕ

В настоящее время в гепатологии представлено большое количество симптоматических лекарственных препаратов. Несмотря на это, поиск, разработка и внедрение в медицинскую практику новых средств продолжает оставаться актуальным. В первую очередь, это обусловлено высокими требованиями к безопасности этих средств, так как клетки печени, в которых происходит метаболизм ксенобиотиков, наиболее чувствительны к их токсическому действию. Кроме того, разработка комплексных терапий, направленных на восстановление утраченных функций печени, оставляет актуальной потребность в препаратах, обладающих эффективными фармакологическими свойствами, низкой токсичностью и незначительным побочным действием. Поэтому особый интерес проявляется к препаратам, полученным из природных источников, отличающихся высоким профилем безопасности [1].
Заболевания печени различной этиологии проявляются на фоне нарушений регуляции метаболических процессов, активации факторов воспаления и деструкции. Поэтому важным свойством современных гепатопротекторных терапевтических средств является способность проявлять широкий спектр фармакологической активности, включая нормализацию метаболических процессов, детоксикационное, противовоспалительное, мембраностаби-лизирующее, антиоксидантное и, как следствие, антифиброзное действие. Препараты с таким широким спектром действия могут быть особенно перспективны в профилактике и лечении токсических, метаболических и вирусных гепатитов, приводящих к циррозу и гепатоцеллюлярному раку.
В последние годы в качестве перспективных гепатопротекторных лечебных средств рассматриваются биологически активные вещества из высших грибов -базидиомицетов. В этом направлении проводятся широкие экспериментальные исследования. Уже в ранних работах [2;3] было выявлено гепатопротекторное действие экстрактов из базидиомицетов (ЭБ) при индуцированных острых гепатитах у мышей и крыс. В последующих исследованиях [4;5;6] было показано, что ЭБ оказывают гепатопротекторное и мембраностабилизирующее действие при токсических поражениях печени, вызываемых различными химическими агентами: диэтилнитрозамином, диметилнитрозамином, бензопиреном. Также было выявлено онкопротекторное действие ЭБ на моделях гепатокарциногенеза, индуцированного диэтилнитрозамином или Н-нитрозодиэтиламином [4;7].

Особый интерес представляют недавние исследования [8;9], в которых было показано выраженное антифиброзное действие ЭБ на классической модели индукции фиброза печени длительным введением тетрахлорметана - CCl(4). В этих исследованиях было показано, что вызываемый CCl(4) оксидативный стресс приводит к повреждению мембран и генетическихструктур звёздчатых клеток печени, которые трансформируются в миофибробласты, запускающие и поддерживающие процесс фиброгенеза. Было обнаружено, что механизм антифиброзного действия ЭБ обусловлен антиоксидантной активностью, включающей антирадикальную и антиперикисную составляющие.

В последние годы в качестве наиболее перспективного источника эффективных биологически активных веществ рассматривается ЭПО - экстракт, полученный из базидиомицета Pleurotus ostraatus (Вешенка). Антихолистериновое, гиполипидемическое, антиатерогенное действие ЭПО показано как в экспериментальных, так и в клинических исследованиях [10;11;12]. Проведен ряд исследований, выявивших высокий иммуномодулирующий и противоопухолевый потенциал ЭПО [13; 14; 15]. Изучение гепатопротекторного и антифиброзного действия ЭПО активно проводится в последние годы. В работе [16] изучали его влияние на липидный обмен грызунов на модели жировой дегенерации печени, вызываемой длительным потреблением алкоголя. Было показано, что добавление в пищу ЭПО полностью восстанавливало липидный обмен в печени, нормализуя повышенные показатели холестерина и триглицеридов. В исследовании [17] изучали влияние бета-1,3-Д-гликана (БГПО), выделенного из ЭПО, на антиоксидантный статус организма и повреждение генетических структур клеток при введении диметилгидразина (ДМГ). Было показано, что введение БГПО предупреждало повреждение клеток за счёт нормализации функции антиоксидантной системы организма. При этом отмечали значительное уменьшение накопления продуктов перекисного окисления (ПОЛ) в печени и эритроцитах, восстановление активностей антиоксидантных ферментов: глутатион пероксидазы (ГПО), каталазы (КТЛ) и супероксиддисмутазы (СОД). В недавнем исследовании [9] было изучено гепатопротекторное действие ЭПО на стандартной модели быстрого повреждения клеток печени крыс введением СС1(4) в течение 4 дней. Основное внимание уделяли изучению влияния ЭПО на антиоксидантный статус организма. Введение ЭПО на фоне индуцированного гепатотоксического эффекта нормализовало активности печёночных ферментов и основных ферментов антиоксидантной системы.
Гистопатологическое изучение печени показало, что ЭПО защищает клетки печени от повреждающего действия СС1(4), подтверждая тем самым его существенную гепатопротекторную эффективность. Сделан вывод о перспективности использования ЭПО в качестве гепатопротекторного и антифиброзного средства.
Несмотря на большой объём проводимых экспериментальных исследований, в настоящее время в доступной литературе не представлены данные клинического изучения готовых лекарственных форм препаратов из базидиомицетов с гепатопротекторным терапевтическим действием.
В настоящих информационных материалах представлены результаты экспериментальных и клинических исследований гепатопротекторного действия экстракта мицелия вешенки(штамм Pleurotus ostmatus) и препаратов на его основе.

ХАРАКТЕРИСТИКА ЭКСТРАКТА МИЦЕЛИЯ ВЕШЕНКИ

Под руководством профессора Герасименя В.П. разработана и запатентована оригинальная технология получения экстракта мицелия вешенки. Экстракт представляет собой гель коричневого цвета с приятным травянисто-медовым вкусом и ореховым запахом, получаемый из мицелия вешенки, культивируемого в регулируемых асептических условиях на жидкой питательной среде при интенсивном аэрировании (патент РФ № 2192873 от 20.01.2003 г).
Состав экстракта мицелия вешенки включает:
  1. углеводы (глюкоза, галактоза, манноза, арабиноза, ксилоза, галактоза, глюкозамин),
  2. аминокислоты (аспаргин, серин, треонин, глютамин, пролин, глицин, аланин, валин, лейцин, лизин, гистидин, аргинин, цистин, метионин, тирозин, фенилаланин),
  3. жирные кислоты (С10-С22),
  4. органические кислоты (масляная, молочная, уксусная, яблочная, щавелевая),
  5. витамины (В1, В2, В3, В6, PR D, E, С),
  6. металлы и микроэлементы (натрий, калий, кальций, магний, фосфор, сера, железо, цинк, марганец, селен, медь, алюминий, бор, барий, кремний, литий и др.),
  7. воду
Все эти вещества находятся в природных, естественных соотношениях, что, в значительной степени, определяет высокую биологическую активность экстракта.
Экстракт является основой для производства трех лечебных препаратов для приема внутрь:
  • ОВОДОРИН (гель) (ООО «Инбиофарм»). Экстракт расфасован по 50 мг и 100 мг в стеклянные флаконы, по 10 флаконов в упаковке. Гель перед употреблением разводят в 100 мл кипяченой воды, охлажденной до комнатной температуры. (Св.Гос. регистрации 77.99.23.У.10520.12.08 от 11.12.2008 г.)
  • ОВОДОРИН (сироп ) (ООО «Инбиофарм»). Сироп расфасован по 80мл в стеклянные флаконы с мерной ложкой. Содержит ЭМВ, дигидрокверцетин, фруктозу, пищевой стабилизатор и воду. Сироп перед употреблением в количестве 4 мл (содержит 50 мг геля) или 8 мл ( содержит 100мг геля) разводят в 100мл кипяченой воды, охлажденной до комнатной температуры. (Св.Гос.регистрации 77.99.23.У.11103.12.08 от 22.12.2008 г.)
  • - ОВО-Д (сироп) (ООО НПК «Пульмомед»). Сироп расфасован по 80мл в стеклянные флаконы с мерной ложкой. Содержит ЭМВ, фруктозу, пищевой стабилизатор и воду. Сироп перед употреблением в количестве 4 мл (содержит 50 мг геля) или 8 мл (содержит 100мг геля) разводят в 100мл кипяченой воды, охлажденной до комнатной температуры. (Св. Гос.регистрации № 77.99.23.3.У. 1380.3.07 от 06.03.2007 г.)

1. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ ЭМВ

1.1. Исследование антиоксидантной активности ЭМВ.
Учитывая современные представления об определяющей роли перекисного окисления липидов и свободных радикалов в патогенезе деструктивных поражений печени при действии различных факторов (токсиканты, инфекции, воспаление, нарушения диеты, возраст и т.д.), в Институте химической физики им. Н. Н. Семёнова РАН были проведены исследования прямого антиоксидантного действия экстракта мицелия вешенки в модельных экспериментах.
Изучали содержание антиоксидантов (АО) в препарате и его антирадикальную активность (АРА) по отнош ению к перикисны м радикалам м етодом хемилюминисценции. Исследования проводили на модели инициированного окисления этилбензола при температуре Т=60°С.
Эффективное содержание АО и их относительную АРА определяли кинетическим методом, добавляя исследуемый образец в модельную реакцию инициированного окисления этилбензола с контролем интенсивности хемилюминесценции. Полученные результаты соотносили с данными известных антиоксидантов: дибунолом, кверцетином, а-токоферолом и его синтетическим аналогом хроманом-С.
Показано, что экстракт содержит до 0,5 моль/1 г АО, проявляет существенную антиоксидантную активность, превышая АРА дибунола, кверцетина и не уступая АРА хромана-С и а-токоферола.
Таким образом, в данном эксперименте было показано, что экстракт мицелия вешенки способен оказывать выраженное антиоксидантное действие и является перспективным для применения в качестве гепатопротектора при дегенеративных поражениях печени.
1.2. Исследования гепатопротекторного действия ЭМВ при токсическом поражении печени.
Исследование гепатотропротекторного действия препарата было проведено в ОАО «ВНЦ БАВ», Старая Купавна, Россия в соответствии с «Методическими рекомендациями по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» 2000 г. В исследованиях использовали традиционные экспериментальные модели поражения печени у мышей и крыс. Описание гистологических исследований печени животных при повреждающем действии гепатотоксинов дано на основании работы [1]. В качестве препарата сравнения использовали Гептрал (S-аденозин- L-метионин).
1.2.1. АНТИОКСИДАНТНОЕ И ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЕ ДЕЙСТВИЕ ЭМВ ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ПОРАЖЕНИИ ПЕЧЕНИ ТЕТРАХЛОРМЕТАНОМ.
Быстрое токсическое поражение печени у аутбредных мышей-самцов массой 27 -29 г индуцировали введением СС1(4) в виде 50% раствора в масле в течение 4-х дней в дозе 1,0 мл/кг ( контрольная группа). Экстракт в экспериментальных группах вводили внутрижелудочно в дозах 50 мг/кг или 100 мг/кг за 1 час до введения гепатотоксина. Препарат Гептрал в группе сравнения вводили в дозе 1000 мг/кг внутрибрюшинно за 30 минут до СС1 (4).
В контрольной группе токсическое поражение печени сопровождалось цитолизом гепатоцитов, что отражалось в повышении активностей трансаминаз - АлАТ и АсАТ на 26% и 21%, соответственно. Кроме того, отмечали снижение активности амилазы на 22% и уровня глюкозы в крови на 26%.
В работе [1] при морфологических исследованиях паренхимы печени в контрольной группе были выявлены нарушения микроциркуляции, сопровождаемые расширением синусоидов и центральных вен, наличием белковой и обширной жировой дистрофии гепатоцитов, признаками углеводной дистрофии. Отмечали повреждение эндотелия сосудов средней степени. В ряде клеток печени наблюдался лизис цитоплазмы, а также некротические процессы. По данным морфометрических исследований число поврежденных гепатоцитов составляло до 65%.
При введении экстракта в дозах 50 и 100 мг/кг наблюдали нормализацию активностей АлАТ и АсАТ до уровня показателей интактных животных, повышение уровня глюкозы и активности амилазы.
Выбранный в качестве препарата сравнения Гептрал в условиях данного эксперимента не оказывал гепатопротекторного действия, т.к. не снижал активностей трансаминаз и не способствовал нейтрализации токсического действия СС1(4) на активность амилазы.
Известно, что пусковым механизмом повреждения клеток печени при воздействии СС1(4) является активация процессов перекисного окисления. Поэтому для выяснения механизма гепатопротекторного действия ЭМВ в данном эксперименте определяли активность ферментов СОД и ГПО в эритроцитах, характеризующих антиоксидантный потенциал организма. Влияние экстракта на показатели активности антиокисдантных ферментов приведены в таблице 1.
Таблица 1
Влияние ЭМВ на активность антиоксидантных ферментов в эритроцитах мышей при токсическом поражении печени тетрахлорметаном
.

Группа животныхСОД, ед/г НЬГПО,ед/г НЬ
Интактные141,1 +4,530,4 + 0,4
Модель с СС1(4), п= 20121,1 +5,6*р<0,0525,4+1,8*р < 0,05
СС1(4) + ЭМВ, 50 мг/кг, п =20151,1 + 4,3**р< 0,001  
31,9+1,7**р < 0,05
СС1(4) + ЭМВ, 100 мг/кг, п =20  
138,4 +2,0** р<0,0134,0 + 0,9** р<0,01

Примечание:
* - достоверность различий с данными группы интактных животных,
** - достоверность различий с данными группы животных с токси­ческим поражением печени тетрахлорметаном.
Как видно из таблицы, введение экспериментальным животным CCl(4) сопровождалось угнетением антиоксидантной ферментной системы - снижением активностей СОД и ГПО, что соответствует характеристикам данной модели токсического поражения печени. При введении экстракта в дозе 50 мг/кг активности СОД и ГПО восстанавливались до показателей интактных животных. При увеличении дозы эксракта - до 100 мг/кг также наблюдалась нормализация показателей активности СОД и ГПО, однако повышение СОД было менее выражено, чем при дозе ЭМВ, равной 50 мг/кг.
Полученные результаты согласуются с данными литературы [9], в которых также была выявлена способность экстракта из мицелия Pleurotus ostreatus восстанав­ливать активность антиокидантных ферментов при токсическом поражении печени тетрахлорметаном.
Таким образом, при токсическом поражении печени, индуцированном тетрахлорметаном, экстракт мицелия вешенки оказывает гепатопротек­торное действие, уменьшая цитолиз гепатоцитов. При этом основным механизмом действия ЭМВ является антиоксидантный эффект, обеспечивающий поддержание необходимой активности антиоксидантных ферментов.

1.2.2. ИССЛЕДОВАНИЕ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ ЭМВ ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ С ХОЛЕСТАТИЧЕСКИМ СИНДРОМОМ, ИНДУЦИРОВАННОМ ТЕТРАЦИКЛИНОМ.
Моделирование экспериментального гепатита у крыс с помощью повреждающей дозы тетрациклингидрохлорида (125 мг/кг однократно в сутки в течение 3-х дней) сопровождалось синдромами холестаза (увеличивались уровень показателя экскреторной функции печени ЩФ на 38% и содержание ТГ на 85%, по сравнению с показателями интактных животных).
В условиях данной модели структура печени животных опытной группы была нарушена в значительной степени. На периферии долек гепатоциты были поражены значительной белковой и частично жировой дистрофией. Гепатоциты центра печеночных долек не были повреждены, балочная структура долек была сохранна. Эндотелий в триадах выглядел набухшим и утолщенным [1].
ЭМВ в дозе 50 мг/кг способствовал нормализации активности ЩФ до уровня интактных животных. Отмечалось снижение уровня ТГ на 42% в сторону нормализации. При увеличении дозы экстракта до 100 мг/кг активность ЩФ также нормализовалась. Содержание ТГ снизилось ещё в большей степени - на 53%, приблизившись к нормальному уровню.
Препарат Гептрал в дозе 1000 мг/кг снижал активность ЩФ и содержание ТГ на 8% и 27%, соответственно.
Таким образом, гепатопротекторный эффект экстракта мицелия вешенки на модели гепатита, индуцированного тетрациклином, проявился в нормализации активности ЩФ и существенном снижении уровня ТГ.
1.2.3. ВЛИЯНИЕ ЭМВ НА СОСТОЯНИЕ ПЕЧЕНИ ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ, ИНДУЦИРОВАННОМ ЭТАНОЛОМ.
Острый токсический гепатит у крыс индуцировали введением 48% этанола в дозе 10 мл/кг внутрижелудочно. Гепатотоксин вводили в течение 8 дней. Экстракт мицелия вешенки вводили внутрижелудочно в дозах 50 мг/кг и 100 мг/кг за 1 час до этанола. Препарат сравнения Гептрал вводили в дозе 250 мг/кг внутрибрюшинно за 30 минут до гепатотоксина.
При введении этанола наблюдалось увеличение в сыворотке крови животных уровня ТГ на 34% по сравнению с интактными животными, что свидетельствовало о нарушении липидного обмена в печени, характерного для данного вида гепатита [16].
Морфологические исследования печени при алкогольной интоксикации показали [1], что данное поражение вызывало значительное сужение синусоидов и центральных вен, застой в периферических сосудах, утолщение стенок периферических сосудов. В центральных зонах долек наблюдалась мелкокапельная жировая инфильтрация. По всему полю долек с нарастанием к периферии отмечалась баллонная и углеводная дистрофия гепатоцитов. В некоторых дольках была нарушена балочная структура. Отмечалось наличие волокон соединительной ткани в портальных полях вокруг центральных вен.
Применение ЭМВ в обеих дозах приводило к нормализации уровня ТГ в сыворотке крови. В то же время Гептрал в условиях данной патологии печени вызывал дальнейший рост уровня ТГ и проявлял тенденцию к повышению активностей АлАТ и ЩФ.
В ходе эксперимента при макроскопическом изучении желудков животных было обнаружено значительное изменение слизистой желудка крыс, получавших экстракт в дозе 100 мг/кг. Слизистая была бледная и сильно истончена. У животных, получавших ЭМВ в дозе 50 мг/кг, слизистая желудка имела нормальный вид и не отличалась от таковой у интактных животных.
Таким образом, в эксперименте показано, что при алкогольной интоксикации экстракт мицелия вешенки в обеих дозах проявил отчетливую гепатозащитную активность, проявляющуюся в нормализации липидного обмена в печени. Однако, прием препарата ЭМВ в дозе 100 мг/кг не совместим с одновременным приемом алкоголя.
1.2.4. ИССЛЕДОВАНИЕ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ ЭМВ ПРИ ОСТРОМ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ, ИНДУЦИРОВАННОМ D-ГАЛАКТОЗАМИНОМ.
D-галактозамин вводили крысам внутрижелудочно однократно в дозе 500 мг/кг в течение 3-х дней. Экстракт мицелия вешенки вводили внутрижелудочно в дозах 50 мг/кг и 100 мг/кг за 1 час до введения гепатотоксина. Препарат Гептрал в дозе 1000 мг/кг вводили внутрибрюшинно за 30 минут до гепатотоксина.
Токсическое поражение печени D-галактозамином сопровождалось достоверным повышением показателей синдрома цитолиза гепатоцитов - повышением активности трансаминаз (АлАТ на 30%, АсАТ на 25%) и ЩФ на 40%. Кроме того, гепатотоксин снижал активность белоксинтезирующей функции печени.
При патоморфологическом исследовании печени крыс на исследуемой модели было обнаружено нарушение микроциркуляции, значительное сужение синусоидов и центральных вен, повреждение эндотелия сосудов [1]. В периферических сосудах отмечались кровоизлияния. По всему полю печеночных долек наблюдалась выраженная мелкозернистая белковая дистрофия и, в меньшей степени, мелкокапельная жировая инфильтрация гепатоцитов. Отмечалось набухание гепатоцитов. Мембраны и межклеточные контакты гепатоцитов были нарушены. По данным морфометрии доля поврежденных гепатоцитов составляла в среднем 50%.
Курсовое введение ЭМВ в дозе 50 мг/кг замедлило развитие цитолиза и сопутствующей гиперферментемии (активность трансаминаз достигла нормы и заметно снизилась активность ЩФ). Уровень общего белка повысился до нормы. При двукратном увеличении дозы ЭМВ до 100 мг/кг отмечена полная нормализация активности печёночных ферментов. Активность ЩФ достигла показателя нормы. Препарат сравнения Гептрал, вводимый в дозе 1000 мг/кг, проявлял аналогичный эффект подавления цитолитического действия D-галактозамина. Однако, следует отметить, что Гептрал вызывал заметное повышение уровня креатинина на 25% в сыворотке крови экспериментальных животных.
Таким образом, экстракт мицелия вешенки в дозе 50 и 100 мг/кг эффективен для устранения синдрома цитолиза и сопутствующей гиперферментемии, восстановления белоксинтезирующей функции печени в условиях модели токсического поражения печени D-галактозамином.
1.2.5. ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЕ ДЕЙСТВИЕ ЭМВ ПРИ ГИПЕРЛИПИДЕМИИ, ВЫЗЫВАЕМОЙ АТЕРОГЕННОЙ ДИЕТОЙ.
Гиперлипидемию (ГЛП) индуцировали у крыс атерогенным рационом (АР), содержащим в масляной суспензии 10% холестерина и 1% холевой кислоты (из расчета 1мл жировой нагрузки на 100 г массы тела) в течение 10 дней. Экстракт мицелия вешенки в дозе 50 мг/кг вводили внутрижелудочно в те же сроки.
Из таблицы 2 следует, что содержание животных на атерогенном рационе сопровождалось достоверным увеличением активности АлАТ, на фоне подавления активности АсАТ, и увеличением активности ЩФ в 1,4 раза по сравнению с интактными животными. Содержание общего холестерина возрастало в 3,5 раза за счет его накопления в составе атерогенных фракций липопротеидов. Уровень ТГ повысился по сравнению с нормой в 2 раза.

Таблица 2
Влияние ЭМВ на биохимические показатели сыворотки крови крыс с экспериментальной гиперлипидемией
Биохимические показатели сыворотки крови   
Группы животных
ИнтактнаяАтерогенный рацион (АР)АР + ЭМВ, 50 мг/кг
ХС общ, мг/100 мл56,6 ± 2,779,8 ± 3,2*58,6 ± 2,4**
ХС ЛПВП, мг/100 мл33,9 ± 2,322,5 ±1,3*31,9 ±1,8**
ХСЛПНП, мг/100 мл11,0±2,230,2 ± 3,2*12,4 ± 1,5**
ХСЛПОНП, мг/100 мл11,9±0,627,1 ± 1,6*14,0 ± 0,9**
ТГ, мг/100 мл59,5 ± 2,9135,3 ±7,9*70,4 ± 4,4"
АсАТ, ед/л292 ± 22162 ± 16*266 ± 32**
АлАТ, ед/л85 ±5110 ±8*98 ±8
ЩФ, ед/л230 ± 12306±18*250 ± 15**
Билирубин, мкмоль/л7,4 ± 0,97,1 ±0,36,2 ± 0,7

*- достоверность различий с интактной группой
**-достоверность различий с контрольной группой (с АР)

По данным морфологических исследований печень экспериментальных животных с гиперлипидемией имела нарушения балочной структуры на пе­риферии печеночных долек, отмечались повреждения эндотелия центральных вен, наблюдалась мелкозернистая белковая и мелкокапельная жировая дистрофия [1].
У животных, получавших экстракт в дозе 50 мг/кг, нормализовались все по­казатели липидного обмена. Об улучшении функционального состояния печени после введения ЭМВ свидетельствовала нормализация активностей ферментов АлАТ, АсАТ и ЩФ до показателей интактных животных.
Таким образом, при экспериментальной гиперлипидемии, вызываемой атерогенной диетой, экстракт мицелия вешенки в дозе 50 мг/кг обладает выраженным липидрегулирующим действием в сочетании с гепатопротекторным эффектом.

2. КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ЭМВ

2.1 Клиническая апробация ОВО-Д у больных гиперлипидемией.
На сегодняшний день наиболее эффективными гиполипидемическими препаратами, снижающими ХС, липопротеиды низкой и очень низкой плотности, являются статины - ингибиторы ХС ГМГ-Со А-редуктазы. Однако, длительный прием статинов может приводить к выраженным побочным эффектам, в том числе и опасным для жизни. Так, действие на печень проявляется существенным повышением уровня трансаминаз в крови. При приеме статинов возможно также повышение содержания билирубина в крови. Таким образом, статины могут оказывать гепатотоксическое действие.
В данном разделе представлены результаты исследований, проведенных на базе ГКБ № 23 г. Москвы под руководством заведующего лабораторией клинической фармакологии НИЦ ММА им. Сеченова, д.м.н., профессора А.К. Стародубцева.
В исследование были включены больные гиперлипидемией (ГЛП) ПА и 11Б типов в количестве 14 человек. Препарат ОВО-Д назначали однократно в сутки в дозе 100 мг. Курс монотерапии - 30 дней.
В таблице 3 представлена динамика биохимических показателей крови больных с ГЛП на фоне применения препарата ОВО-Д.
Полученные результаты, свидетельствуют о том, что препарат ОВО-Д проявляет выраженную липидрегулирующую активность, обеспечивающую снижение содержания в крови триглицеридов, общего холестерина, холестерина липопротеидов низкой и очень низкой плотности, в сочетании с повышением содержания холестерина липопротеидов высокой плотности.


Таблица 3
Динамика биохимических показателей крови больных с ГЛП на фоне применения препарата ОВО-Д.

Показатели Исходные значенияЧерез 2 неделиЧерез 3 неделиЧерез 4 недели
Билирубин общ. мкмоль/л13,23 ±0,5712,03 ±0,580,22 ± 0,48* р< 0,0510,2 ± 0,47* р <0,05
Билирубин прямой мкмоль/л 2,57 ± 0,752,32 ± 0,142,22 ± 0,12,22±0,112
Билирубин непрямой мкмоль/л  
10,66 ±0,949,71 ± 0,898,0 ±0,467,99 ± 0,4* р <0,05
АлАТ, ед/л32,5 ±4,421,2 ±2,9 18,66 ± 1,78* р <0,05  20,55 ±3,09
АсАТ, ед/л 34,5 ±1,6324,9 ± 2,61*р <0,0518,89 ± 1,78* р <0,0122,33 ±3,09*р <0,05
КФК, ед/л112,22+ 11,173,33 ± 10,6482,45 ±6,845,22±5,95*р <0,01
ЩФ, ед/л121,83± 13,79119,22 ±6,07120,5± 17,56130,5± 15,41
Глюкоза, м моль/л5,47 ± 0,345,71 ±0,375,27 ±0,485,04 ± 0,21
Холестерин общ., ммоль/л6,67 ± 0,33 N 3,9 - 5,96,53 ±0,286,03 ± 0,35,33 ± 0,2 5*р <0,05
ХСЛПНП, ммол/л4,54 ±0,24,52 ±0,353,41 ±0,31*р <0,053,21 ± 0,15*р <0,01
ХСЛПОНП ммол/л0,80 ±0,050,68 ± 0,10,82 ±0,070,61 ±0,0 4*р <0,05
ХСЛПВП ммол/л1,32 ±0,091,39 ±0,081,53 ±0,151,59 ±0,23
Триглицериды ммоль/л1,76 ±0,081,49 ±0,141,58 ±0,091,35 ± 0,09* р <0,05

- достоверность различий с исходными

В то же время препарат не оказывает отрицательного влияния на активность ферментов АлАТ, АсАТ, КФК и уровень билирубина. Более того, отмече­на тенденция к снижению этих показателей. Не выявлено влияние ОВО-Д на активность ЩФ и на содержание глюкозы в крови.
Таким образом, препарат ОВО-Д в дозе 100 мг в сутки проявляет выраженную липидрегулирующую активность и не оказывет гепатотокси-ческого действия.
2.2 Клиническая апробация ОВО-Д у больных с метаболическим синдромом, осложненным жировым гепатозом и стеатогепатитом
Исследования проводили на базе Омской государственной медицинской Академии на кафедре пропедевтики внутренних болезней под руководством д.м.н., профессора З.Ш. Голевцовой.
Метаболический синдром (МС) - заболевание, в основе которого лежит наследственно детерминированное нарушение обмена жиров, белков и улеводов. МС характеризуется сочетанием висцерального ожирения, дислипидемии, артериальной гипертонии, инсулинорезистентности и определяет раннее развитие атеросклероза, сахарного диабета, стеатоза печени, жирового гепатита и высокий риск сосудистых катастроф.
Сочетание дислипидемии с синдромом цитолиза и внутрипеченочного холестаза исключает назначение статинов и фибратов, так как может привести к трансформации жирового гепатита в цирроз печени.
Использование препарата ОВО-Д, способного снижать уровень холестерина, атерогенных фракций липопротеидов, триглицеридов и обладающего гепатопротекторным эффектом, позволяет оптимизировать лечение больных с метаболическим синдромом.
В исследование было включено 30 больных с метаболическим синдромом с артериальной гипертонией, дислипидемией, синдромом цитолиза и внутрипеченочного холестаза в возрасте от 35 до 72 лет. Препарат ОВО-Д пациентам назначали 1 раз в сутки (утром натощак за 1 час до еды) в дозе 100 мг в течение 21 дня. Оценку состояния пациентов проводили сразу после лечения и через 2 месяца после его окончания.
Дополнительные гепатопротекторы и гиполипидемические средства больным в ходе лечения не назначались.
Результаты клинической апробации препарата ОВО-Д представлены в таблице 4.


Таблица 4
Динамика показателей липидного и углеводного обмена, биохимических маркеров синдрома цитолиза в процессе лечения препаратом ОВО-Д у больных с метаболическим синдромом.

ПоказателиИсходные значенияПосле леченияЧерез 2 месяца после леченияНормальные величины
ХС общий, м моль/л6,47 ± 0,656,06 ± 0,915,42 ± 0,645,42±0,64
ХС ЛПНП, м моль/л4,71 ± 0,664,06 ± 0,933,35 ± 0,693,4 ± 0,7
ХС ЛПВП, м моль/л0,85 ± 0,221,1 ±0,281,26 ±0,291,6 ±0,3
ТГ, ммоль/л2,9 ± 0,561,84 ±0,972,51 ± 0,631± 0,63
Глюкоза крови, ммоль/л5,41 ± 0,915,22 ± 0,665,65 ± 0,734,7 ± 0,4
Билирубин общ. мкмоль/л16,79 ±7,9515,8 ±7,2515,98 ±5,878,5 - 20,5
АлАТ, ммоль/л1,12 ±0,280,43 ± 0,270,41 ±0,150,45
АсАТ, ммоль/л0,61 ±0,170,39 ±0,160,34 ±0,110,44
ЩФ (МЕ/л)199,22 ±98,59158,84±60,78158,1 ±65,1До 290
ГГТ (МЕ/л)85,61 ± 23,5947,48 ± 24,7842,62 ±23,557-50
Количество компонентов МС  
4,33 ± 0,722,7 ± 0,482,25 ± 0,70-2

Результаты данного исследования показали высокую гиполипидемическую и гепатопротекторную активность препарата ОВО-Д, а именно:

уровень ЛПНП снизился на 13,8% непосредственно после лечения и на 28,8% через 2 месяца после окончания курса;
уровень ЛПВП увеличился на 29,4% и 48,2%,соответственно;
уровень ТГ снизился на 36,5% и 13,4%,соответственно;
- активность ферментов снизилась: АлАТ - на 61,6 и 63,3%, АсАТ- на 36 и 44,2%, ЩФ - на 20,1 и 20,2%, ГГТ - на 44,7 и 49,4%, соответственно, по отношению к исходным показателям в группе.
Исследуемый препарат в указанной дозе хорошо переносился больными, за весь период наблюдения не зарегистрировано случаев осложнений, побочных эффектов и аллергических реакций.
Таким образом, применение препарата ОВО-Д в дозе 100 мг в сутки у больных с метаболическим синдромом, осложнённым жировым гепатозом и стеатогепатитом приводило к нормализации липидного обмена, восстановлению функционального состояния печени и к существенному снижению выраженности симптомов основного заболевания.

Выводы

  1. Экстракт мицелия вешенки и препараты на его основе способны оказывать выраженное антиоксидантное действие, обеспечивающее подавление «кислородного стресса» в организме и клетках печени, как за счёт содержащихся в препарате антиоксидантов,так и путём активации ферментов антиокислительной системы организма.
  2. При токсическом поражении печени, индуцированном тетрахлорметаном, ЭМВ обнаруживает гепатозащитные свойства, уменьшая синдром цитолиза гепатоцитов.
  3. Гепатопротекторный эффект ЭМВ на модели гепатита, индуцированного тетрациклином, проявился в нормализации активности щелочной фосфатазы и существенном снижении уровня триглицеридов.
  4. При алкогольной интоксикации ЭМВ в дозе 50 мг/кг проявил отчетливую гепатозащитную активность, проявляющуюся в нормализации липидного обмена в печени. Однако прием экстракта не совместим с одновременным приемом алкоголя.
  5. В условиях токсического поражения печени D-галактозамином ЭМВ устраняет синдром цитолиза гепатоцитов и сопутствующую гиперферментемию, восстановливая белоксинтезирующую функцию печени.
  6. При экспериментальной гиперлипидемии, вызываемой атерогенной диетой, ЭМВ оказывает выраженное липидрегулирующее действие в сочетании с гепатопротекторным эффектом.
  7. При лечении больных с гиперлипидемией препарат ОВО-Д в дозе 100 мг в сутки проявляет выраженную липидрегулирующую активность, оказывая гепатопротекторное действие.
  8. Применение препарата ОВО-Д в дозе 100 мг в сутки у больных с метаболическим синдромом, осложнённым жировым гепатозом и стеатогепатитом, приводило к нормализации липидного обмена, восстановлению функционального состояния печени и к существенному снижению выраженности симптомов основного заболевания.

Список литературы

Радкевич Л.А. Пути фармакологической коррекции некоторых меха низмов хронических патологий печени. Дисс. докт. биол. наук. Москва, 1998, 290 с.
Lin JM, Lin СС, Chiu HF, Yang JJ, Lee SG. Evaluation of the ant i- inflammatory and liver-protective effects of anoectochilus formosanus, ganoderma lucidum and gynostemma pentaphyllum in rats. Am. J. Chin. Med. 1993; 21: 59-69.
Kim DH, Shim SB, Kim NJ, Jang IS. Beta-glucuronidase-inhibitory activity and hepatoprotective effect of Ganoderma I ucidum. Biol. Pharm. Bull. 1999; 22: 162-164.
Barbisan LF, Miyamoto M, Scolastici C, Salvadori DM, Ribeiro LR, Eira AF, de Camargo JL. Influence of aqueous extract of Agaricus blazei on rat liver toxicity induced by different doses of diethylnitrosamine. J. Ethnopharmacol. 2002. Nov; 83(1-2): 25-32.
Akamatsu S, Watanabe A, Tamesada M, Nakamura R, Hayashi S, Kodama D, Kawase M, Yagi K. Hepatoprotective effect of extracts from Lentinus edodes mycelia on dimethylnitrosamine-induced liver injury. Biol. Pharm. Bull. 2004. Dec; 27(12): 1957-60.
Lakshmi B, Ajith ТА, Jose N, Janardhanan KK. Antimutagenic activity of methanolic extract of Ganoderma lucidum and its effect on hepatic damage caused by benzo[a]pyrene. J Ethnopharmacol. 2006 Sep 19; 107(2):297-303.
Ajith ТА, Janardhanan KK. Chemopreventive activity of a macrofungus Phellinus rimosus against N-nitrosodiethylamine induced hepatocellular carcinoma in rat. J. Exp. Ther. Oncol. 2006; 5(4): 309-21.
Lin WC, Lin WL. Ameliorative effect of Ganoderma lucidum on carbon tetrachloride-induced liver fibrosis in rats. World J. Gastroenterol. 2006. Jan. 14; 12(2): 265-70.
Jayakumar T, Ramesh E, Geraldine P. Antioxidant activity of the oyster mushroom, Pleurotus ostreatus, on CCI(4) - induced liver injury in rats. Food. Chem. Toxicol. 2006, Dec; 44(12): 1989-96.
Opletal L, Jahodar L, Chobot V, Zdansky P, Lukes J, Bratova M, Solihova D, Blunden G, Dacce G.G, Patel A.V. Evidence for the anti-hyperlipidaemic activity of the edible fungus Pleurotus ostreatus. Br. J. Biomed. Sci. 1997, Dec; 54(4): 240- 3.
Bobek P, Ozdin O, Mikus M. Dietary mushroom (Pleurotus ostreatus) ameliorates atherogenic lipid in hypercholesterolaemic rats. Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 2003, Jul; 30(7): 470-5.
ОВО-Д - новый гиполипидемический препарат. Экспериментальные и клинические исследования. НПК «ПУЛЬМОМЕД». Информационные материалы. Выпуск 1. М. 2006 г.
Gu YH, Sivam G. Cytotoxic effect of oyster mushroom Pleurotus ostreatus on human androgen-independent prostate cancer PC-3 cells. J. Med. Food. 2006, Summer; 9(2): 196-204.
Lavi I, Friesem D, Geresh S, Hadar Y, Schwartz B. An aqueous polysaccharide extract from the edible mushroom Pleurotus ostreatus induces antiproliferative and proapoptotic effects on HT-29 colon cancer cells. Cancer Lett. 2006, Nov. 28; 244 (1): 61-70.
Sarangi I, Ghosh D, Bhutia SK, Mallick SK, Maiti TK. Anti-tumor and immunomodulating effects of Pleurotus ostreatus mycelia-derived Proteoglycans. Int. Immunopharmacol. 2006, Aug; 6(8): 1287-97.
Bobek P, Ginter E, Jurcovicova M, Ozdin L, Mekinova D. Effect of oyster fungus (Pleurotus ostreatus) on serum and liver lipids of Syrian hamsters with a chronic alcohol intake. Physiol. Res. 1991; 40(3): 327-32.
Bobek P, Galbavy S. Effect of pleuran (beta-glucan from Pleurotus ostreatus) on the antioxidant status of the organism and on dimethylhydrazine-induced precancerous lesions in rat colon. Br. J. Biomed. Sci. 2001; 58(3): 164-8.

Источник информации: www.ovodorin.ru

Возврат к списку